جيدمجهرينبغي أن يتمتع بثلاث خصائص:
دقة جيدة: تشير قدرة الدقة إلى القدرة على إنتاج صور منفصلة لكائنات موضوعة بشكل وثيق بحيث يمكن تمييزها ككيانين منفصلين. دقة:
حوالي 0.2 مم (200 ميكرومتر) بالعين المجردة
يبلغ حجم المجهر الضوئي حوالي 0.2μm
يبلغ طول المجهر الإلكتروني حوالي 0.5 نانومتر
. القرار يعتمد على معامل الانكسار. يحتوي الزيت على معامل انكسار أعلى من الهواء.
تباين جيد: يمكن تحسينه بشكل أكبر عن طريق تلطيخ العينة.
التكبير الجيد: ويتم ذلك باستخدام العدسات المقعرة.
Brightfield أو المجهر الضوئي
يُنتج المجهر الساطع أو المجهر الضوئي صورًا داكنة على خلفية أفتح.
المجهر الميداني المظلم
المبدأ: في الفحص المجهري المظلم، تظهر الأجسام مشرقة على خلفية داكنة. يمكن تحقيق ذلك باستخدام مكثفات Darkfield الخاصة.
التطبيقات: يستخدم لتحديد الخلايا القابلة للحياة وغير الملوثة والبكتيريا الرقيقة مثل الملتوية التي لا يمكن ملاحظتها بواسطة المجهر الضوئي.
مجهر التباين الطوري
إنه يتصور الخلايا الحية عن طريق خلق اختلافات التباين بين الخلايا والماء. فهو يحول الاختلافات الدقيقة في معامل الانكسار وكثافة الخلايا إلى تغييرات يمكن اكتشافها بسهولة في شدة الضوء.
مفيد للدراسة:
الحركة الميكروبية
تحديد شكل الخلايا الحية
كشف المكونات البكتيرية مثل الأبواغ والهيئات المشمولة.
المجهر الفلوري
كيف تعمل: عندما تتعرض أصباغ الفلورسنت للضوء فوق البنفسجي، فإنها تثار وتتألق، أي أنها تحول هذا الشعاع غير المرئي ذو الطول الموجي القصير إلى ضوء ذو طول موجي أطول (ضوء مرئي).
التطبيقات: المجهر Epifluorescent لديه التطبيقات التالية:
يتألق ذاتيًا عند وضعه تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية، مثل السيكلوسبورين
الكائنات الحية الدقيقة المغلفة بأصباغ الفلورسنت، مثل الأتريول البرتقالي لطفيليات الملاريا (QBC) والأورينول لمرض السل المتفطرة.
التألق المناعي: يستخدم الأجسام المضادة الموسومة بأصباغ الفلورسنت للكشف عن مستضدات سطح الخلية أو الأجسام المضادة التي ترتبط بمستضدات سطح الخلية. هناك ثلاثة أنواع: IF المباشر، IF غير المباشر، وقياس التدفق الخلوي.
ميكروسكوب الكتروني
تم اختراعه بواسطة إرنست روسكا عام 1931. وهو يختلف عن المجهر الضوئي بطريقة مختلفة.
هناك نوعان من EM:
ناقل الحركة EM (نوع MC، يفحص البنية الداخلية، الدقة 0.5 نانومتر، يعطي رؤية ثنائية الأبعاد)
المسح الضوئي EM (يفحص السطح بدقة 7 نانومتر، مما يوفر عرضًا ثلاثي الأبعاد)
مبادئ المجهر الإلكتروني النافذ
تحضير العينة: قم بتنفيذ الخطوات التالية على الخلايا لتحضير عينات رقيقة جداً (20 إلى 100 نانومتر)
التثبيت: إصلاح الخلايا باستخدام الجلوتارالدهيد أو رباعي أكسيد لتحقيق الاستقرار فيها.
الجفاف: يتم بعد ذلك تجفيف العينة باستخدام مذيب عضوي مثل الأسيتون أو الإيثانول.
التضمين: يتم دمج العينة في بوليمر بلاستيكي، والذي يتصلب بعد ذلك ليشكل كتلة صلبة. معظم البوليمرات البلاستيكية غير قابلة للذوبان في الماء. ولذلك، يجب أن تكون العينات المجففة تماما قبل التضمين.
التقسيم: يتم بعد ذلك تقطيع العينة إلى مقاطع رفيعة باستخدام مشراح فائق الدقة ويتم تثبيت المقاطع على شرائح معدنية (النحاس).
تقنية النقش بالتجميد: هذه طريقة بديلة لتصور العضيات داخل الخلايا لإعداد العينات.
يتم تجميد الخلايا بسرعة، ثم تسخينها ← تمزقها باستخدام سكين لكشف العضيات الداخلية ← تساميها ← تغطيتها بطبقات من البلاتين والكربون.
تشمل التدابير لتحسين تباين EM ما يلي:
التلوين بمحلول أملاح المعادن الثقيلة مثل سترات الرصاص وخلات اليورانيل
تلطيخ سلبي بالمعادن الثقيلة مثل حمض الفوسفوتنجستيك أو خلات اليورانيل.
التظليل: يتم تغليف العينة بطبقة رقيقة من البلاتين أو أي معدن ثقيل آخر بزاوية 45 درجة بحيث يضرب المعدن الكائنات الحية الدقيقة من جانب واحد فقط.
